Исследования генов и белков Открытый доступ

Абстрактный

Антитело к MyoD уменьшает органический феномен миогенина и агрин-индуцированное скопление нейротрансмиттерных рецепторов

 Эрика Э. Андерсон1, Дэвид Х. Кэмпбелл2, Келли Эзелл1, Пол Р. Стэндли2 и Уэйд А. Гроу1

Семейство миогенных рестриктивных факторов, а также MyoD и миогенин, направляют миогенез и формирование контракторного соединения. MyoD активирует органическое явление миогенина, и одна из функций миогенина заключается в активации органического явления нейротрансмиттерного рецептора (AChR) в контракторном соединении. Двигательные нейроны высвобождают агрин, когда они приближаются к мышечным волокнам в процессе развития, что приводит к скоплению существующих AChR в положение формирования контракторного соединения. У нас есть ранее неоспоримые данные о том, что непрерывное воздействие белка на MyoD или миогенин уменьшает агрин-индуцированное скопление AChR в культуре мышечных клеток C2C12. Наша цель состояла в том, чтобы специально установить, как MyoD и миогенин движутся в процессе развития. Методы: Культуры клеток C2C12 подвергались экспериментальным манипуляциям, а также антителам к MyoD и миогенину и морфолино миогенина. Endo-Porter имел обыкновение усиливать поглощение клетками экспериментальных манипуляций. Анализы скоплений AChR были выполнены для оценки влияния белка или морфолино на скопление AChR, вызванное агрином. Вестерн-блоты выявляют органический феномен миогенина при воздействии белка или морфолино. Результаты: Результаты, полученные здесь, показывают, что воздействие белка на миогенин в течение всего восьми часов уменьшит скопление AChR, вызванное агрином, в миотрубочках. У нас есть неоспоримые доказательства того, что некоторые экспериментальные манипуляции уменьшают органический феномен миогенина одновременно с уменьшением скопления AChR, вызванного агрином. Эти результаты устанавливают много специфических моментов, однако MyoD и миогенин движутся в формировании контракторного соединения, демонстрируя, что воздействие белка на MyoD снижает органический феномен миогенина одновременно с уменьшением скопления AChR, вызванного агрином. Заключение: Эти результаты свидетельствуют о том, что MyoD имеет решающее значение для агрин-индуцированного скопления AChR через механизм, который имеет активацию органического феномена миогенина, что приводит к активации органического феномена AChR, ассоциированного с Nursingd, в конечном итоге к производству соответствующего уровня AChR для агрин-индуцированного скопления AChR и образованию контракторного соединения. AChR были помечены путем связывания α-бунгаротоксина, конъюгированного с тетраметилродамином (Molecular Probes). Культуры инкубировали в среде, содержащей токсин, в течение получаса при 37 °C для маркировки AChR после семидесяти двух часов в DM. Стекла капота трижды промывали температурным фосфатным буферным раствором (PBS), монтировали в течение десяти минут с парой параформальдегида в PBS, трижды промывали PBS, дегидратировали в холодном древесном спирте в течение пяти минут при -20 °C и монтировали на предметные стекла увеличительного стекла в монтажной среде Vectashield для видимого света (Vector Laboratories). Кластеры AChR визуализировались с помощью инвертированного увеличительного стекла Associate in Nursing IX70 Olimbos под объективом 20X (что обеспечивает полное увеличение 200X). Флуоресцентные изображения Associate in Nursingd были получены в виде файлов JPG высокого разрешения с помощью камеры Olimbos с пакетом цифровой обработки изображений Magnafire.Яркие кластеры AChR были обнаружены на всех аспектах миотрубок на флуоресцентных снимках. каждое изображение в оттенках серого было проанализировано с помощью формулы идентификации объектов Cell Profiler. край, используемый в формуле, был очерчен, поскольку минимальная интенсивность флуоресценции, которую должен показывать pel, чтобы считаться частью кластера. Эксперименты с краем показали, что минимальная яркость в семьдесят лучших очерчивает pel с достаточным количеством видимого света, чтобы считаться частью кластера, и этот порог использовался для всех анализов. чтобы убедиться в обоснованности суждения и последовательной количественной оценке, край и все альтернативные настройки были непрерывными и постоянными во всех командах и снимках. Модели активации последовательности на протяжении миогенеза предсказывают, что гены включаются последовательно, начиная с активации миогенина MyoD. Первоначальный план миогенной дифференциации, объединенный с транскрипцией по всему геному, связывает и идентифицирует экспрессию для лучшего выяснения программы миогенной дифференциации в клетках класса musculus. Миогенные ограничительные факторы направляют миогенез, а также сборку контракторного соединения. В частности, первоначальный план неоспорим, что в растущих миобластах MyoD нацелился на гены, связанные со спецификацией соединения и контрактором.
Ключевые слова: AChR; Агрин, C2C12; экспрессия последовательности; MyoD; Миогенин; контракторное соединение.