Журнал фармации и фармацевтических исследований Открытый доступ

Абстрактный

Оптимизация условий ферментации для внеклеточного производства терапевтического белкового препарата уриказы с помощью Aspergillus welwitschiae с использованием методологии поверхности отклика

Нура Эль-Ахмади Эль-Наггар, С.А. Харун, Эман М. Эль-Веши и А.А. Шериф

Введение Уриказа обычно используется в клиническом анализе для определения уратов в крови и других биологических жидкостях. Микробные уриказы как белковые препараты оказались эффективными при лечении гиперурикемии и подагры, а также при профилактике и лечении гиперурикемии лизиса опухолей

Цели : Потенциальная культура, штамм Aspergillus sp. 1-4, продемонстрировала высокую внеклеточную активность уриказы. Этот уриколитический грибковый изолят был идентифицирован как штамм Aspergillus welwitschiae 1-4 на основе фенотипических характеристик вместе с анализом последовательности ITS-региона. Продукт секвенирования был помещен в базу данных GenBank под номером доступа MG323529. Экспериментальный дизайн Плакетта-Бермана с 20 запусками был применен для скрининга пятнадцати переменных на их значимость для продукции уриказы Aspergillus welwitschiae.

Результаты : Время инкубации было наиболее значимой переменной, влияющей на производство уриказы, за ней следовали дрожжевой экстракт и размер инокулята со значимыми значениями P 0,0002, 0,0083 и 0,0118; соответственно. Эти переменные были выбраны для исследований оптимизации с использованием центрального композитного дизайна.

Выводы Было обнаружено, что максимальная продукция уриказы (59,01 ед/мл) Aspergillus welwitschiae достигается при следующих условиях ферментации (г/л): сахароза 30, мочевая кислота 3, пептон 2, дрожжевой экстракт 2, NaNO3 2, K2HPO4 1, MgSO4.7H2O 0,2, NaCl 0,2 и FeSO4.7H2O 0,03?, время инкубации 7 дней, температура 35, pH 6, размер инокулята 4 мл/50 мл среды, возраст инокулята 72 часа и объем среды 50 мл/коническая колба 250 мл. В целом в среде после статистической оптимизации было достигнуто 2,5-кратное увеличение продукции уриказы Aspergillus welwitschiae по сравнению с неоптимизированной базальной средой (23,58 ед./мл) до применения метода Плакетта-Бермана. результат лечения ОЛЛ.