Исследования генов и белков Открытый доступ

Абстрактный

Очистка и характеристика пероксидазы из стебля брокколи (Brassica oleracea l. Var. Italica)

Курратулин Ахмад, Амна Мехмуд, Зайнаб Саид, Мадиха Файяз

Активность фермента увеличивалась во время очистки, что могло оказать благотворное влияние на растения. Методы и результаты: Очистка фермента включала экстракцию, осаждение (NH4)2SO4, диализ с последующей последовательной хроматографией с сефадексом G-75 и сефадексом DEAE A-25. Очищенный фермент характеризовался временем, стабильностью pH, ионами металлов, термостабильностью и определялась кинетика субстрата с использованием гваякола в качестве субстрата. Кратность очистки для очищенной пероксидазы стебля брокколи составила 72,83 с выходом 1,5%. Оптимальное время для активности фермента составляло 6 мин., и он оставался стабильным в диапазоне pH от 4 до 8 с оптимальным pH 6 при использовании гваякола в качестве субстрата. Фермент показал максимальную активность при 30 °C и оставался стабильным до 50 °C. Значение Km пероксидазы брокколи составило 0,35 м.моль/мл и 33 U/мл для субстрата гваякола с использованием графика Лайнуивера-Берка и аналогично с использованием графика Михаэлиса-Ментена значения составили 0,34 м.моль/мл. Такие металлы, как Na+, Ca2+, K+, Mg2+ и Zn2+ не оказали влияния на активность фермента.